Le prélèvement d'échantillons

 

1.- Objectifs.

2.- L'outillage fondamental.

3.- Le prélèvement d'échantillons.

4.- Conseils d'envoi.

 1.- Objectifs.

Cette page est un outil d'appui pour le vétérinaire clinique et son objectif est faciliter et optimiser le prélèvement et l'envoi d'échantillons pour son analyse chez EXOPOL.

Il y figure détaillées nos recommandations sur l'outillage fondamental de prélèvement d'échantillons, les emballages à utiliser, les méthodes de conservation et le transport plus approprié.

Il est important tenir compte que le type d'échantillon, les conditions de transport et sa conservation sont des facteurs clés pour bien interpréter les résultats analytiques.

EXOPOL propose une large gamme de méthodes d'analyse : microbiologique isolement, antibiogramme, sérologie, parasitologie et immunocytochimie que l'on applique selon chaque cas.

En fonction des échantillons reçus et de la demande du vétérinaire, EXOPOL choisit les techniques les plus adéquates pour obtenir un rapport prix-diagnostique optimum.

Outillage fondamental de prélèvement d'échantillons

2.- L'outillage fondamental.

Pour optimiser les possibilités d'isoler la bactérie, l'échantillon doit être pris, si possible, avant d'instaurer un traitement antibiotique.

Les organes envoyés doivent procéder d'animaux vivants, sacrifiés par le vétérinaire ou morts récemment (2 à 4 heures maximums) et immédiatement réfrigérés. Ils doivent être des animaux ayant montré des symptômes de la maladie bien qu'il soit souhaitable qu'ils ne soient pas à l'état moribond.

Les échantillons choisis (laits, sangs, sérum, organes, écouvillons, etc.) avec le rapport du vétérinaire doivent être envoyés avec le matériel de transport plus approprié.

Pour pouvoir prélever les échantillons appropriés nous recommandons porter dans le véhicule de travail le suivant outillage minimum :

Divers types d'écouvillons

A.- Tubes stériles et fermeture hermétique, type Venojet.

Sans anticoagulant, pour le transport de sérums, lait, urine et autres liquides. Deux ou trois millilitres est un volume d'échantillon suffisant.

Avec anticoagulant :

Héparine, pour le transport de sangs si on demande une culture bactérienne ou une culture de cellules lymphoïdes (virémies, tuberculose, etc.).

EDTA ou Héparine pour la recherche d'hémoparasites et le transport de liquide articulaire ou céphalo-rachidien.

 

B.- Flacons ou pots avec fermeture hermétique

Pour le transport d'organes, de tissus, de fèces, etc. Il faut éviter les flacons en verre à cause des éventuelles ruptures. On peut utiliser les pots de ramassage d'urine des pharmacies, les tupperwares simples que l'on achète aux supermarchés ou n'importe quel récipient hermétique. Il est important de vérifier l'étanchéité de la fermeture pour éviter l'écoulement de liquides pendant le transport. Pour éviter de favoriser les contaminations bactériennes on ne doit pas mélanger, en aucun cas, des organes différents dans le même pot.

C.- Seringues et aiguilles stériles

Pour le prélèvement de sang, liquide articulaire, liquide céphalo-rachidien, contenu stomacal…

D.- Sacs hermétiques

Les écouvillons sont faciles à transporter et n'ont pas besoin de réfrigération, il suffit joindre le rapport et utiliser une enveloppe.

Pour inclure des organes ou des fœtus si on ne possède pas de pots hermétiques. Les sacs à congeler aliments en plastique fin et résistant sont pratiques. Il est indispensable laisser égoutter l'organe pour éliminer la plus grande quantité de liquides ainsi que faire plusieurs nœuds pour optimiser l'étanchéité de la fermeture. Ne jamais mélanger différents organes dans le même sac et ne pas oublier identifier chaque sac.

E.- écouvillons avec moyen de transport (Amies ,Stuart ou tout autre).

On les obtient chez les distributeurs de matériel vétérinaire ou dans les pharmacies. Le moyen de transport est un gel qui empêche les cellules de dessécher et limite la détérioration de l'échantillon. Ils sont très pratiques puisqu'ils permettent prélever des échantillons d'animaux vivants (écouvillons rectales, rhino-pharyngés, vaginales, oculaires, cutanés, etc.) ou d'organes après une nécropsie. Leur transport est moins cher, ils n'ont pas besoin de réfrigération et il élimine des risques biologiques. Pour prélever correctement un échantillon avec une écouvillon, nous devons le faire tourner sur lui-même, en frottant contre les parois tissulaires pour desquamer des cellules.

F.- Gants

Nous pouvons les utiliser pour envoyer des fèces, il suffit de tourner le gant après avoir prélevé l'échantillon directement du rectum.

G.- Boîtes en liège blanc

Si l'ont doit transporter des échantillons réfrigérés, et surtout en été, il est conseillé d'utiliser ces boîtes. Vous devez vous assurer que le contenu intérieur sera bien emballé étant donné qu'elles ne sont pas totalement étanches.

H.- Blocs de glace-gel

Un envoi réfrigéré parfait

Indispensables pour les transports réfrigérés. Ne jamais utiliser de l'eau congelée.

I.- Le marqueur permanent

Pour pouvoir identifier les pots, les sacs en plastique, les tubes ou les écouvillons.

J.- La feuille de prélèvement d'échantillons

C'est un des composants les plus importants de l'envoi et cependant souvent il est absent, ce qui pose des graves problèmes au moment de décider les analytiques qu'il faut faire dans le laboratoire. La suivante information fondamentale est à inclure :

• Outillage fondamental pour nécropsies
• Nom du vétérinaire et/ou de la société
• Nom de l'éleveur
• Identification des organes envoyés ou de l'endroit d'où l'on a pris l'écouvillon
• Courte anamnèse du cas en signalant les symptômes, les traitements et les vaccinations
• Analytique demandée ou soupçonnée

L'outillage habituel pour la réalisation d'une nécropsie

K.- L'outillage de nécropsies

L'outillage habituel pour la réalisation d'une nécropsie est le suivant: les gants, le bistouri, les pinces, les ciseaux, le désinfectant, le masque et le tablier jetable.

3.- Le prélèvement d'échantillons.

Pour savoir quels échantillons vous devez envoyer vous pouvez télécharger la "Guide pratique de prélèvement d'échantillons" en format pdf.

• Choisissez des animaux avec de symptômes cliniques et non traités, si possible.
• Travaillez avec la plus grande asepsie.
• Envoyez l'échantillon au laboratoire aussitôt que possible.
• Animaux vivants
• Utilisez une caisse résistante.
• Faites de nombreux trous d'aération dans la caisse, surtout en été.
• Ne mettez pas ni de l'eau ni de la nourriture
• Recouvrez le fond avec du matériel absorbant pour les excréments
• Envoyez-le à dernière heure de l'après-midi.

Le sang

Sang complet avec de l'anticoagulant.

Réfrigéré à 4ºC il doit arriver au laboratoire avant les 24 heures suivantes au moment de son extraction. Protéger les tubes des coups.

• Pour des cultures bactériennes : EDTA ou Héparine.
• Pour des cultures de lymphocytes (virémies, tuberculoses): seulement Héparine.
• Pour des hémoparasites : tout anticoagulant ou directement frottis de sang sur porte-objet de verre.

Le sérum

• La réfrigération n'est pas nécessaire. Ne jamais congeler les sérums avec caillot. On peut congeler le sérum propre après avoir enlevé le caillot. Protéger les tubes des coups.
• En tubes sans anticoagulant. Pour maximiser le volume de sérum, laisser le tube incliné ou inversé à température ambiante pendant 30 minutes.

Les fèces

• Pour analyse coprologique
  • La réfrigération n'est pas nécessaire. Ne pas congeler. Utiliser un récipient hermétique
  • Recueillir directement du rectum avec un gant ou un sac en plastique.
• Pour des cultures bactériologiques
  • Réfrigérées, non congelées et temps de transport minimum. Récipient hermétique.
  • Le même procédé que le précédent.

Les curetages cutanés

• Pour diagnostique d'ectoparasites, infections bactériennes o fongiques.
• La réfrigération n'est pas nécessaire. Ils s'envoient en flacons stériles.
• Nettoyer et désinfecter la peau. Gratter doucement avec une lame stérile de bistouri les bords de la zone affectée en prenant du poil et de la peau et en approfondissant jusqu'à ce qu'il saigne.

Le liquide céphalo-rachidien ou synovial

• Réfrigérés et en tubes avec anticoagulant.
• Prélever l'échantillon avec une seringue stérile. Désinfecter le point d'injection et éviter la contamination avec du sang pour une asepsie optimale.

L'urine

• Dans un flacon hermétique et stérile, réfrigérée, jamais congelée.
• La recueillir avec le maximum de stérilité.

Le lait

• La réfrigération n'est pas nécessaire si elle a été prélevée correctement. En tube stérile à bouche étroite (5mm)
• Nettoyer le mamelon comme avant la traite, exclure les premiers jets de lait. Remplir le tube ou flacon stérile.
• Protéger les tubes contre les coups

Les écouvillons ou écouvillons

• La réfrigération n'est pas nécessaire. Ils doivent porter un moyen de transport du type AMIES ou STUART. Il est conseillé de les envoyer immédiatement au laboratoire mais s'il faut les conserver pendant un week-end n'oubliez pas de les réfrigérer.
• Ils sont utiles pour les animaux vivants ou les nécropsies. Ils permettent de recueillir des échantillons d'exsudats avec un haut contenu de cellules dans les cavités : nasale, trachéobronchique, endocervicale, rectale et conjonctivale. On peut aussi prélever des organes après les nécropsies. Introduire profondément l'écouvillon dans la cavité et frotter contre les parois en le faisant tourner sur lui-même.
• Vider préalablement le rectum pour éviter entraîner des fèces.
• Introduire l'écouvillon dans le creux du spéculum jusqu'au col utérin pour éviter entraîner du mucus vaginal.

Les organes provenant de nécropsie

La réfrigération est nécessaire. Si on demande une analyse bactériologique ne pas les congeler. Si on ne demande que l'Immunocytochimie IPX on peut les congeler.

• Faire la nécropsie juste après la mort ou 2 heures après au plus tard.
• Conservez les plus grandes conditions d'asepsie possibles.
• Envoyez les organes affectés entiers ou des grands morceaux, chacun dans un récipient ou un sac indépendant. Les extrêmes de l'intestin doivent être liés pour éviter des pertes de contenu et des contaminations.
• Assurez-vous de les introduire dans un récipient ou un sac hermétique.

Les cadavres

• La réfrigération est nécessaire. Si une analyse bactériologique est demandée ne pas les congeler. Si on ne demande que l'Immunoperoxydase on peut les congeler.
• S'il est mort depuis plus de 4 heures et il n'est pas réfrigéré probablement il est contaminé. Assurez-vous de les introduire dans un récipient ou un sac hermétique.
• Évitez s'il est possible d'envoyer des cadavres entiers, surtout en été, vous pouvez envoyer les organes isolés (sauf dans le cas de fœtus de petite taille).

4.- Conseils d'envoi.

Les échantillons doivent être TOUJOURS accompagnés par :

• Les données du vétérinaire.
• L'identification de la ferme.
• L'identification des organes envoyés en signalant l'espèce. En cas d'écouvillons, signaler l'endroit d'où on a prélevé l'échantillon.
• Une brève anamnèse.
• L'analytique demandé ou le soupçon clinique.
• Si la réfrigération est nécessaire, n'utilisez pas de l'eau congelée mais des blocs de gel ou de la glace sèche.