Indice	Uso de autovacunas frente a Mycoplasmas en conejos de granja.
Indice	Boucher, S. Nouille, L., Albizu I*., Baselga, R.*, Cabinet Veterinarie SCP NSBABB, Zac de la Buzeniere BP 539, 85505 Les Herbiers, Francia *Exopol. Polig. Rio Gállego, San Mateo de Gállego, 50840 Zaragoza, Spain. Tel. 976694525, exopol@exopol.com.   INTRODUCCIÓN En la patología de los conejos de granja destacan los procesos respiratorios y reproductivos (Boucher y Nouille, 2002) que comprometen la salud y la productividad de la granja. En dos trabajos previos hemos puesto en evidencia el papel de los Mycoplasmas en procesos reproductivos y respiratorios (Boucher y cols., 2001; Villa y cols., 2001; Tabla 1), análogamente a lo que ocurre en otros roedores (Brown, MB y Reyes 1991, Furr y cols.). Concretamente la utilización de la inmunoperoxidasa permitió determinar la presencia de Mycoplasmas pulmonis en un 43,1 % de los pulmones de animales con problemas respiratorios y en un 38% de los tractos reproductivos de hembras con problemas frente a un 3% y un 0% de los animales sanos (respectivamente). Tabla 1. Animales enfermos Animales sanos Respiratorios 43% 3% Reproductivos 38% 0% Por otro lado en las muestras recibidas en nuestro laboratorio hemos encontrado Mycoplasmas en alguna de las muestras en el 42% (41 casos) de los 98 casos recibidos con problemas reproductivos y en el 48% (160 casos) de los 333 casos con problemas respiratorios en los que el veterinario solicitaba el estudio de Mycoplasmas. En algunas especies de Mycoplasmas se ha demostrado la presencia de una capa de exopolisacáridos capsulares (CPS) envolviendo a la célula (Almeida et al., 1991, 1992; Tajima et al., 1985; Rurangirwa er al., 1995; Bansal et al., 1995, Niang et al., 1998 ) y aunque no ha sido investigado, podemos pensar que este CPS es un factor de virulencia que actúa del mismo modo que en algunas especies bacterianas evitando la fagocitosis por macrófagos y neutrófilos. Para fagocitar estas bacterias es necesario que el hospedador produzca anticuerpos frente al CPS que es muy poco inmunogénico. Para inmunopotenciarlo los CPS se unen covalentemente a proteínas transportadoras, tal y como se hace con Haemophilus influenzae en humana y se está investigando con Streptococcus pneumoniae (Ahmad 1999, Peltola 1999) y otras bacterias como Staphylococcus aureus (Fattom 1997), pero también se pueden inmunopotenciar con liposomas (Amorena y cols., 1994, Wong 1992, Garcon 1991, Brownlie 1993). M. pulmonis es un patógeno muy importante en las colonias de roedores destinadas a la investigación (Homberger, y Thomann) y se han dedicado importantes esfuerzos en la consecución de una vacuna para su control (Barry y Lay, 1995; Lai et al., 1995). En este trabajo se describe la utilización de liposomas y exopolisacáridos de Mycoplasmas en la elaboración de autovacunas para la protección de granjas comerciales de conejos. MATERIAL Y MÉTODOS Cepas Las cepas de Mycoplasmas utilizadas se aislarón a partir de tejido pulmonar de animales con problemas respiratorios de las explotaciones en las que se valoró la autovacuna. Las cepas se aislaron tal y como se describe en (Villa y cols, 2001). Purificación de los exopolisacáridos y elaboración de autovacunas Los exopolisacáridos fueron purificados esencialmente tal y como se describe en (Amorena y cols, 1994), aunque los tiempos de crecimiento de las cepas de Mycoplasmas se alargaron durante 5-6 días en Mycoplasmas broth suplementado con suero porcino (20%). Para inmunopotenciar los exopolisacáridos se utilizaron liposomas elaborados siguiendo la técnica de "Dry reconstituted liposomes" tal y como se describe en (Amorena y cols, 1994). Para resuspender los liposomas liofilizados se utilizó hidróxido de aluminio comercial (AlOH3; Rehydragel, Reheis, Dublín). Descripción de la explotación El ensayo se llevó a cabo en una granja situada en Mouchamps, Francia. La granja es una explotación de ciclo cerrado con una capacidad de 800 hembras y arrastraba un problema crónico de neumonías desde hace varios años. Las vacunaciones se hicieron en dos maternidades: una semiintensiva y la otra cerrada tal y como se indica en la Tabla 2. Los gazapos se cebaron posteriormente en una explotación semi-intensiva independiente de las maternidades. Procedimiento vacunal Tal y como se describe en Boucher y Nouaille (2002) los animales se vacunaron en los días 1 y 18 de vida con 0,5cc de la autovacuna. En un período de 2 semanas se vacunó a 428 gazapos que nacieron dejando 3.622 gazapos como control. La elección del grupo vacunado se realizó mediante sorteo de las hembras en el momento de la vacunación y se vacuno a toda la camada sin selección por sexos. Evaluación clínica La evolución clínica de los gazapos la valoró un investigador que no conocía a que grupo pertenecía cada uno de los animales. Los gazapos de cada grupo se mantuvieron en la misma nave y se estudiaron las lesiones pulmonares encontradas en las bajas que se produjeron y los decomisos de los lotes. Asimismo se seleccionaron al azar algunos animales sanos para estudiar la presencia de lesiones pulmonares. También se anotaron los decomisos por pasteurelosis cutánea. RESULTADOS Nave vacunados Semi-intensivo vacunados Nave no vacunados Semi-intensivo no vacunados Destetados 251 177 1732 1890 Total de muertos 11 7 221 % Mortalidad 4,4 3,9 6,1 Autopsias 11 7 89 76 Lesiones pulmonares 2 0 77 51 Sacrificados fin de lote (selección) 10 10 5 5 % lesiones sobre fin de lote 1 2 5 5 % lesiones pulmonares sobre muertos y sacrificados 14,2 11,7 87,2 69,1 Total de lesiones 3 2 82 46 Decomiso por abscesos en matadero 0 1 10 DISCUSIÓN En medicina humana se emplean sistemáticamente las vacunas basadas exclusivamente en los CPS de las bacterias frente a las meningitis bacterianas. Sin embargo los CPS son muy poco inmunogénicos por lo que en algunas de estas vacunas los CPS están unidos covalentemente a proteínas transportadoras, sin embargo está solución no resulta factible en veterinaria por su elevado coste. Los liposomas se han utilizado para vehicular muchas drogas diferentes, para vehicular antígenos T-dependientes (xxx) y T-independientes (xxx) y además se han utilizado con éxito en ensayos de campo frente a Streptococcus suis (Morillo y cols.) e infecciones experimentales con S. aureus (Amorena y cols.). La preparación de los liposomas es muy sencilla y económica y el utilizar liposomas liofilizados facilita la conservación y transporte de las autovacunas elaboradas. En otras especies, por ejemplo en porcino, Mycoplasma infecta a los neonatos en la primera semana de vida y las vacunaciones se realizan en edades muy tempranas. Nuestras primeras experiencias (datos no mostrados) también indicaban la conveniencia de realizar una vacunación temprana en conejos y por está razón se seleccionaron los días 1 y 18. Los resultados obtenidos con este protocolo vacunal demuestran claramente que la vacunación frente a Mycoplasmas de los gazapos disminuyó significativamente (P<0,001) la mortalidad encontrada durante la fase de cebo. Además en los animales necropsiados el % de lesiones pulmonares encontradas entre los animales vacunados fue mucho menor. En condiciones practicas de campo no parece tener mucho sentido vacunar a todos los gazapos nacidos en una explotación, sin embargo sí creemos interesante el utilizar estas autovacunas sobre toda la reposición. REFERENCIAS Morillo, A., Gascón, A., Albizu, I., y Baselga, R. Evaluación de autovacunas frente a Streptococcus suis basadas en exopolisacáridos capsulares. http://www.exopol.com/general/circulares/109circ.html Ahmad H, Chapnick EK. Conjugated polysaccharide vaccines. Infect Dis Clin North Am 1999; 13: 113-133. AL-HADDAWI, M.H., JASNI, S., ZAMRI-SAAD, M., MUTALIB, A.R., SHEIKH-OMAR, A.R. & SHEIKH-OMAR, A.R. 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