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ExopolAutovacunasDiagnóstico

Toma de muestras en problemas reproductivos de rumiantes.

Dra. Elena Gracia Curras, Dra. Ana Belén Fernández, Dr. Bernardino Moreno, Dr. Gema Chacón, Iñaki Albizu, Dr. Rafael Baselga. Exopol. Autovacunas y Diagnóstico. Pol. Río Gallego, D/8, 50840, San Mateo, Zaragoza. exopol@exopol.com, tel 976694525

 

El diagnóstico de los abortos, mortalidad perinatal (2-3 días de vida) y de la infertilidad no es sencillo y algunas veces es infructuoso por varias razones:

  • El agente responsable del proceso no está ya presente cuando el problema aparece clínicamente.
  • Algunos fetos presentan tal estado de autolisis que impide un estudio adecuado.
  • El agente infeccioso no pasa al feto o la placenta (procesos febriles y sistémicos).
  • La cantidad de anticuerpos presentes en el feto (inmunológicamente maduro) limitan la posibilidad de encontrar el antígeno.
  • No todos los fetos abortados tienen porque estar infectados, por ello conviene remitir varios fetos al laboratorio.
  • Las hembras no han seroconvertido en el momento del aborto.
  • Existen causas no infecciosas causantes de problemas reproductivos.
  • El muestreo en casos de infertilidad es difícil.
Cepa de Campylobacter spp. aislada de hisopo endocervical de oveja abortada. En la placa de Columbia Blood Agar se depositaron 25 microlitros de suplemento antibiótico Preston y se extendieron. En la placa así preparada se sembró el hisopo y se incubó hasta 6 días en condiciones de microaerofilia. Obsérvese las colonias de Campylobacter muy pequeñas, no hemofílicas, con aspecto de "gota de agua" que se extienden por la placa. Feto ovino a término cubierto por una capa densa de fibrina. De los órganos fetales se aisló Arcanobacterium pyogenes y por inmunocitoquímica se detectó Chlamydia psittacci en pulmón e hígado. El diagnóstico diferencial se realizó frente a Salmonella, Brucella, Border, Leptospira, Coxiella y Campylobacter, resultando negativo.

 

Como siempre, podemos hacer un diagnóstico presuntivo de la etiología infecciosa de los abortos, a partir de los signos clínicos, edad de las hembras abortadas, situación vacunal, epidemiología del proceso y fundamentalmente a partir del historial de la granja, pero la realidad es que es realmente difícil, especialmente cuando nos enfrentamos a granjas nuevas de las que no conocemos bien su historial anterior.

Como en cualquier otro proceso podemos encontrar cuadros agudos, muy graves y que afectan simultáneamente a un gran número de animales de todas las edades durante un periodo limitado de tiempo y que normalmente están asociados a infecciones nuevas en la explotación o a procesos ya crónicos que recirculan afectando a los animales jóvenes no protegidos inmunológicamente. En todos los casos conviene tomar los datos clínicos y epidemiológicos para poder comparar las características del problema con los resultados del laboratorio, el resultado del tratamiento, los cambios de manejo y la evolución en el tiempo, todo lo cual es una importante fuente de conocimiento. Además los laboratorios agradecemos especialmente el compartir estos datos porque nos ayuda a aprender y a mejorar nuestro trabajo.

En la Tabla1 citamos las principales etiologías infecciosas responsables de problemas reproductivos así como las técnicas habitualmente disponibles para el diagnóstico de cada uno de los patógenos implicados.

ABORTOS

Las causas de abortos las podemos agrupar fundamentalmente en dos. Los agentes que causan una infección primaria del tracto reproductivo (BVD, Border, Clamidia, Leptospiras, etc.) y las que no lo hacen (tóxinas, estrés ambiental o nutricional y enfermedades sistémicas como la agalaxia o la listeriosis).

En casos de abortos, se recomienda enviar el feto (órganos diana en bovino) con placentas y cotiledones en una bolsa limpia y refrigerado, suero de la madre y del feto cuando es posible. Los hisopos también son muy útiles aunque no en todas las patologías.

Patógeno

Órganos diana

Arcanobacterium pyogenes

Pulmón, Hígado, Placenta

Aspergillus spp

Pulmón, Cuajar, Placenta

Brucella

Pulmón, Hígado, Cuajar, Placenta

BVD/Border

Pulmón, Encéfalo

Campylobacter fetus

Pulmón, Hígado, Cuajar, Placenta, Lavados prepuciales

Candida albicans

Pulmón, Hígado, Placenta

Coxiella burnetti

Pulmón, Cuajar, Placenta

Chlamydia

Placenta, Pulmón, Cuajar

IBR

Pulmón Hígado

Leptospira

Hígado, Riñón, Cuajar

Listeria

Hígado, Placenta

Neospora

Corazón, Encéfalo, Músculo

Salmonella spp

Pulmón, Hígado, Placenta, Cuajar

Toxoplasma

Encéfalo, Corazón

Trichomona foetus

Lavados prepuciales y vaginales

 

INFERTILIDAD

El diagnóstico de los problemas de infertilidad es más difícil y normalmente el manejo y la alimentación influye tanto o más que las causas infecciosas, sin embargo no tenemos porque descartarlas a priori.

En caso de infertilidad envía moco cervical, lavados prepuciales y suero de animales con problemas. Los hisopos cervicales permiten localizar algunos patógenos como Chlamydia, Campylobacter, Leptospiras, etc., o con orina obtenida con sondas para la Leptospirosis crónica. Para tomarlos hay que limpiar la vulva con agua y jabón y retirar el moco exterior que aparecerá muy contaminado con patógenos ambientales. Es importante raspar la pared cervical para descamar células girando el hisopo.

Para ver la toma de muestras en lavados prepuciales acude a http://www.cpap.embrapa.br/publicacoes/download.php?arq_pdf=CT45.

METRITIS

La metritis es la inflamación del útero y se produce como un desorden postparto que puede estar asociado a un aborto, retención de placentas, manipulaciones obstétricas o simplemente a una infección ascendente después de un parto normal y más frecuentemente como consecuencia de la manipulación en la inseminación artificial. En caso de metritis envía un hisopo cervical.

Feto bovino sin lesiones macroscópicas aparentes. El diagnóstico diferencial incluyó BVD, IBR, Chlamydia, Neospora, Coxiella, Leptospira interrogans y Campylobacter por inmunoperoxidasa, resultando positivo a BVD en bazo y a Campylobacter fetus en contenido de estómago.
Se realizó un cultivo bacteriano para detectar la presencia de Brucella, Salmonella y Listeria con resultado negativo.
Feto bovino abortado tras 50 días de gestación. Se diagnosticó leptospirosis mediante inmunoperoxidasa. El antígeno de L. interrogans se detectó en hígado y en anejos fetales, utilizando un pool de anticuerpos monoclonales que reconocen epítopos específicos del serogrupo automnalis y de las serovares bratislava, canicola, grippotyphosa, icterohaemorrhagiae y pomona. (Royal Tropical Institute, Holanda). El diagnóstico diferencial incluyó IBR Y BVD.

 

SEROLOGÍA

Enfermedad

Técnica

Observaciones

Brucelosis

Cualquiera

Cualquier resultado positivo debe ser considerado como relevante e informado a las autoridades sanitarias.

IBR

ELISA

No es de utilidad si los animales están vacunados con vacuna sin marcar.

Leptospirosis

Macroaglutinacion

Puede dar falsos negativos, aunque tiene la ventaja de su facilidad.

Microaglutinación

Es necesario estudiar la variación de titulos. Sólo la realizan algunos laboratorios.

Neosporosis
Clamidia
Toxoplasma
Coxiella

ELISA

No sabemos el momento de la seroconversión.

Salmonelosis

Aglutinación

Los resultados son muy inespecíficos porque hay seroconversión por Salmonelas intestinales.

BVD/Border

ELISA

Con vacuna inactivada se distingue a los animales vacunados de los infectados.

Campylobacter

 

No existen técnicas Serológicas.

Los títulos de anticuerpos de la hembra deben ser tomados con cuidado porque un resultado positivo sólo indica que ha habido contacto entre el patógeno y el animal y no que sea la causa del aborto, por lo que normalmente necesitamos sueros pareados en número suficiente y títulos crecientes para tener evidencia de una infección reciente. También podemos comparar la serología de los animales abortados y sanos. El estudio serológico de animales de diferentes edades nos permitirá conocer el momento de seroconversión frente a las diferentes patologías.

Perfiles serológicos transversal

1

2

3

4

5

6

7

8

Grupo de edad

-

-

-

+

+

+

+

+

Explotación infectada previamente con estabilización y entrada de reposición negativa

+

+

+

+

+

+

+

+

Explotación positiva con recirculación

Al final de la gestación los fetos son inmunocompetentes y pueden producir anticuerpos en respuesta a un agente infeccioso con el que entren en contacto. Por lo tanto el hallazgo de inmunoglobulinas en algún líquido fetal, por ejemplo fluido torácico, indica la presencia de un agente infeccioso en el feto. Por otra parte los neonatos adquieren inmunidad maternal por el calostro que puede durar hasta varios meses.

En el caso de BVD la infección en gestación puede dar lugar a animales persistentemente infectados.

ETIOLOGIA (Diagnóstico realizado en Exopol)

Como causas infecciosas hemos encontrado fundamentalmente Chlamydia, Leptospira spp, Coxiella, Campylobacter quedando Salmonella y Toxoplasma como agentes mucho menos importantes. Los datos aportados tienen que considerarse también en función del número de casos estudiados.

En la Tabla1 presentamos los resultados de detección de antígeno encontrados en nuestro laboratorio (casos de los últimos dos años). Se han empleado diferentes técnicas y los resultados microbiológicos son bajos por la gran cantidad de muestras que llegan contaminadas. Estos resultados no son una prevalencia ya que el muestreo está sesgado por las analíticas requeridas por el veterinario y por la cantidad de muestras estudiadas en cada caso, en ocasiones es insuficient o en mal estado. Además el resultado sólo evidencia la presencia de un patógeno y no necesariamente que el patógeno identificado sea el responsable del cuadro clínico.

Tabla 1: Resultados de los análisis en Exopol

Bovino

Caprino

Ovino

A.pyogenes

4% (2903)*

1% (1455)

2% (5190)

Border

5% (211)

2% (571)

BVD

8% (488)

Campy.fetus

21% (253)

6% (157)

12% (464)

Campylobacter

22% (58)

38% (88)

27% (211)

Chlamydia

14% (442)

37% (314)

38% (912)

IBR

7% (442)

L.interrogans

13% (468)

21% (248)

14% (627)

Neospora

38% (192)

Salmonella

1% (2903)

4% (5190)

Toxoplasma

6% (143)

8% (412)

*Porcentaje de positivos del total de casos estudiados (entre paréntesis)

Feto ovino abortado a final de gestación, con áreas de necrosis en hígado y coágulos de sangre en peritoneo por la rotura del hígado. Se aíslo únicamente Campylobacter spp en cultivo puro. Mediante IPX fue negativo a Chlamydia spp, Coxiella burneti, Border Disease, Toxoplasma y Leptospira interrogans. La madre también fue negativa a Brucelosis mediante serología. Cepa de Salmonella abortus ovis en agar XLD tras 48 horas de incubación a 37ºC. Forma colonias pequeñas que se vuelven de color negro debido a la producción de ácido sulfídrico. Aislado en ovino

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